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    lncRNA定量PCR

    背景:

           长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录长度超过200nt的RNA,不直接参与基因编码和蛋白质合成,但是能在表观遗传、转录及转录后水平上调控基因表达,参与了X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程,与人类疾病的发生、发展和防治都有着密切联系,是现代分子生物学的重要研究热点之一!

            近年来关于lncRNA的研究进展迅猛,相关的新数据库层出不穷,例如Broad研究所、哈佛大学和麻省理工共同开发的Human Body Map lincRNAs catalog,Genecode等,但是现在人们了解到的lncRNA只是冰山一角,绝大部分的lncRNA的功能仍然是不清楚的。随着研究的推进,各类lncRNA被大量发现,lncRNA的研究作为RNA研究的新领域,已经成为一个非常吸引人的方向,有待广大科学家去探寻。

     

     

    图  lncRNA从染色质重塑、转录调控及转录后加工等多种层面实现对基因表达的调控图

     

     

    服务概述:

             lncRNA是目前生命科学领域的研究热点分子之一,采用qPCR方法可对lncRNA芯片数据进行验证,以证实lncRNA的实际表达量,还可以检测未知的lncRNA。随着各种生物技术的发展,特别是生物信息学的发展,加快了新lncRNA的发现步伐。

            通过lncRNA qPCR检测,即可简单且可靠地分析哪种lncRNA涉及细胞增殖的变化,细胞周期的影响,分化,自我更新和凋亡。这种基于qPCR的方法操作起来非常简单和方便,可广泛应用于癌症,干细胞,免疫,生物标志物的发现和验证以及各种细胞表型的分析和研究。

            ag网站生物使用Eppendorf Mastercycler® eprealplex实时荧光定量PCR仪,用染料法或Taqman探针法对lncRNA 进行Real Time PCR定量测定 ,技术灵敏度高、线性范围宽、特异性好、重复性佳。同时,可根据客户需求及实验需要为您提供一体化lncRNA荧光定量技术服务,您只需要提供保存完好的组织或细胞样本,本公司专业技术人员将为您量身制定实验方案,完成lncRNA荧光定量PCR实验操作和数据分析,提供完整的实验报告,为您节省大量的时间和精力。

     

    服务内容:

    1、 制定个性化实验方案

            根据不同的实验目的确定适合实验方法、选定合适的内参;

    2、 引物设计、合成及优化

          a.  根据客户提供的基因信息设计引物。

          b.  引物溶解后进行含SG(SYBR®Green)的PCR反应的优化。

    3、RNA抽提

         a.  组织样本:取适量新鲜组织或是保存得当的组织样本,匀浆后加入Trizol试剂进行RNA抽提。

         b.  细胞样本:取适量细胞,用PBS清洗三次后加入Trizol试剂进行RNA抽提。

    4、RNA质量检测

         a.  紫外分光光度法检测RNA在波长260nm和280nm的吸收值,观察A260/A280 、A260/A230比值及连续波长吸收峰,计算RNA溶液浓度并评估RNA纯度。

        b.  使用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。

    5、 逆转录合成cDNA

           按照逆转录酶使用说明将样品RNA逆转录为cDNA。

    6、 荧光定量PCR预实验

           根据样本反转录的cDNA、配置PCR反应体系及进行Real-Time PCR反应。

    7、正式荧光定量PCR实验

           根据预实验结果进行正式实验,以合成的cDNA为模板,进行定量PCR扩增,同时检测每个样品内参基因的表达量,用以校正上样误差。

    8、 结果分析,提供详尽的实验报告

     

    服务特色:

     ·  最先进的设计软件,确保探针及引物设计的特异性

     ·  探针法或染料法定量分析,一切以客户需求为导向

     ·  探针合成委托国内最好的合成公司,确保探针质量

     ·  染料法采用2 -ΔΔc(t) 法,操作简便,节约时间

     ·  正式实验前先进行预实验,慎重对待客户的委托

     ·  普通PCR无扩增条带的基因,保证再做一次重复验证

     ·  报告详尽,数据可靠,结果真实,实验科学

     

    服务流程:

    1、    客户提供需要检测的环状RNA基因名称、登录号或序列;

    2、    确认样本数量、种属、样本类型;

    3、    我司技术部根据客户提供的信息设计好实验方案,销售做出报价合同;

    4、    客户确定无误后签订《ag网站生物-IncRNA qPCR检测服务合同》,并签字(或盖章);

    5、    支付预付款,服务正式启动;

    6、    提供实验样品(细胞、组织、血液);

    7、    技术员根据合同实验方案开展实验;

    8、    实验结束后,发送初步实验报告;

    9、    支付实验尾款;

    10、  发送详细实验报告,完成实验项目。

     

    我们提供:

    1、    实验所需的试剂;

    2、    RNA提取质量检测电泳图;

    3、    定量检测原始数据、扩增曲线、溶解曲线;

    4、    详细的实验报告、结果分析。
       
     

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